蛋白质提取方法-------列举10种方法
一、植物组织蛋白质提取方法(summer)
1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适当加入),准备提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4 小时)。
3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃
4、提取上清夜,样品制备完成。
蛋白质提取液:300ml
1、1Mtris-HCl(PH8) 45ml
2、甘油(Glycerol)75ml
3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g
这种方法针对SDS-PAGE,垂直板电泳!
二、
植物组织蛋白质提取方法 (summer)
三氯醋酸—丙酮沉淀法
1、在液氮中研磨叶片
2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜,然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清。
3、加入等体积的冰浴丙酮(含0.07%的β-巯基乙醇),摇匀后离心(4℃8000rpm以上1 小时),然后真空
干燥沉淀,备用。
4、上样前加入裂解液,室温放置30 分钟,使蛋白充分溶于裂解液中,然后离心(15℃8000rpm以上1小
时或更长时间以没有沉淀为标准),可临时保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白,然后可分装放入-80℃备用。
药品:
提取液:含10%TCA 和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮
裂解液:2.7g 尿素0.2gCHAPS 溶于3ml 灭菌的去离子水中(终体积为5ml),使用前再加入1M 的
DTT65ul/ml。
这种方法针对双向电泳,杂质少,离子浓度小的特点!当然单向电泳也同样适用,只是电泳的条带会减少!
三、
组织:肠黏膜 (newinbio)
目的:WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达
应用TRIPURE 提取蛋白质步骤:
含蛋白质上清液中加入异丙醇:(1.5ml每1mlTRIPURE用量)
倒转混匀,置室温10min
离心:12000 g,10min,4度,弃上清
加入0.3M盐酸胍/95%乙醇:(2ml每1mlTRIPURE 用量)
振荡,置室温20min
离心: 7500g,5 min,4 度,弃上清
重复0.3M盐酸胍/95%乙醇步2 次
沉淀中加入100%乙醇 2ml
充分振荡混匀,置室温20 min
离心: 7500g,5min,4度,弃上清吹干沉淀
1%SDS溶解沉淀
离心:10000g,10min,4度
取上清-20 度保存(或可直接用于WESTERN BLOT)
存在的问题:加入1%SDS 后沉淀不溶解,还是很大的一块,4 度离心后又多了白色沉定,SDS 结晶?测
浓度,含量才1mg/ml左右。
解决:提蛋白试剂盒,另外组织大小适中,要碎,立即加2X BUFFER,然后煮5-10分钟,效果很好的。
四、
lysis solution:(yog)
Protein extraction buffer (Camiolo buffer):
100 ml= (0.075M Potassium Acetate) 0.736g
(0.3M) NaCl 1.753g
(0.1M) L-arginine basic salt 1.742g
(0.01M) EDTA-HCl 0.292g
(0.25%) Triton X-100 250. ul
up to 100 ml with dH20. pH 7.4. Then 0.2 um filter.
1. Freeze tissue in liquid nitrogen.
2. Rinse in PBS then mince.
3. Add 1 ml Camiolo extraction buffer per 100 mg of tissue.
4. Homogenize for 1 minute at 4\\'C.
5. Spin at 3,000. rpm/15 minutes/4\\'C.
6. Remove supernatant and save in another tube.
7. If necessary, dialize the supernatant against PBS with
50mM/L Tris-HCl pH 7.4.
五、
植物材料:水稻苗,叶鞘,根(ynibcas)
1、200 毫克样品置于冰上磨碎
2、加lysis buffer,离心,10000rpm,4度,5min 取上清
3、重复离心5min
lysis buffer:urea np-40 ampholine 2-me pvp-40
六、
蛋白质样品制备(sigma)
秧苗蛋白质样品的提取按Davermal 等(1986)的方法进行。
100mg材料剪碎后加入10mgPVP-40(聚乙烯吡咯烷酮)及少量石英砂,用液氮研磨成粉,加入1.5 ml 10% 三
氯乙酸(丙酮配制,含10mM 即0.07%β-巯基乙醇),混匀,-20℃沉淀1 小时,4℃,15000 r/min离心15
min,弃上清,沉淀复溶于1.5ml冷丙酮(含10 mMβ-巯基乙醇),再于-20℃沉淀1 小时,同上离心弃上清,
(有必要再用80%丙酮(含10 mMβ-巯基乙醇所得沉淀低温冷冻真空抽干。
按每mg干粉加入20μl(可调) UKS液[9.5 M尿素,5mM 碳酸钾,1.25%SDS,0.5%DTT(二硫苏糖醇),
2% Ampholine (Amersham Pharmacia Biotech Inc,pH3.5-10),6% Triton X-100],37℃温育30min,期间搅
动几次,28度 (温度低,高浓度的尿素会让溶液结冰)16000 r/min离心15 min,离心力越大时间长一点
越好!上清即可上样电泳。或者-70 度保存
七、
植物根中蛋白质的抽取(phenol)
(1) sample, 液氮研磨
(2) 装1.5 ml centrifuge 用tube
(3) 加 1M KH2PO4+K2HPO4 700 ul
(4) 12000 rpm, 4度, 10-15minite
(5) 取上层液,蛋白质就在里面
八、
SDS extraction followed by acetone precipitation – simple extraction protocol that does not require phenol.
Recommended start protocol for whole tissue extractions.(hgp)
1. Grind 1 g of fresh tissue to a powder with liquid nitrogen in a mortar and pestle.
2. Add 5 mL of extraction media (0.175 M Tris-HCl, pH 8.8, 5% SDS, 15% glycerol, 0.3 M DTT) directly to
mortar and continue grinding for an additional 30 sec.
3. Filter homogenate through two layers of miracloth into a 50 mL Falcon tube at room temperature.
4. Immediately add 4 volumes of ice cold 100% acetone to filtered homogenate, mix by vortexing and place at -20
C for at least one hour to precipitate proteins.
5. Centrifuge at 5000 g for 15 min to collect precipitated protein, decant supernatant.
6. Gently blot residual acetone from container with Kimwipe and then wash pellet in 15-20 mL of cold 80%
acetone. Be sure to thoroughly break-up pellet by pipetting, vortexing or sonication.
7. Repeat steps 5 and 6.
8. Collect final protein precipitate by centrifugation at 5000 g for 15 min and dry pellet by inverting on Kimwipe
for 15 min at 37 C.
9. Resuspend final pellet in 0.5-1 mL of IEF extraction solution (8 M urea, 2 M thiourea, 2% CHAPS, 2% Triton
X-100, 50 mM DTT, 0.2% pH 3-10 ampholytes) by pipetting and vortexing at 25-30 C. Incubate sample for 1 h at
room temperature with agitation. Do not heat sample under any circumstances as this will lead to carbamylation of
proteins.
10. Centrifuge for 10 min at 12000 g and use supernatant to rehydrate IPG strips.
11. If protein quantitation is necessary, precipitate protein sample with TCA or acetone prior to performing
Bradford or Lowry assay as detergents and reducing agents interfere with these assays.
Phenol extraction followed by methanolic ammonium acetate precipitation – an effective protocol for sample
preparation from protein-poor, recalcitrant tissues such as plants (see Hurkman and Tanaka, 1986, Plant
Physiology 81:802-80
九、
材料:细菌蛋白(puc18)
用甲醇提取的,冻干后用缓冲液溶解的。样品缓冲液是一般的。其中含又2%的SDS,20mmol 的2-巯基乙
醇。
十、
线粒体蛋白的提取 (bioon)
Isolation for Mitochondria
Modification by Bioon
Materials and reagents:
homogenizing buffer:
100 mM mannitol
10 mM Tris-HCl buffer (pH 7.5)
5 mM MgCl2
关 于 蛋 白 质
1 mM EGTA
1 mM DTT
leupeptin (0.1 ug/ml)
0.1M Na2CO3
Methods:
- 10*6 Cells were washed with ice-cold PBS and lysed by homogenizing in 1 ml buffer (ice-cold) containing 100
mM mannitol, 10 mM Tris, 5 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 1 mM DTT, leupeptin (0.1 ug/ml)
- Subjected to Polytron homogenization for three-four bursts of 3-10 s each at a setting of 6.5.
- Intact cells and nuclei were separated by centrifugation at 120 g for 5 min at 4℃
- Supernatants were centrifuged at 10,000 g for 10 min to collect the heavy (mitochondrial) membrane pellet.
- Cytoplasmic fractions were obtained by centrifuging supernatants at 100,000 g for 30 min.
- Resuspended pellet to 0.25mg/ml in fresh preparation of 0.1M Na2CO3 (pH 11.5)
- Incubated on ice for 30 min.
- Ultracentrifugation at 100000g for 1h at 4℃ to precipitate the mitochondria membrane protein. And the
supernatants are mitochondrial matrix. 0.5mg of proteins in mitochondria can get 100ug of proteins (the
alkali-resistant fractions)
Ref.: PNAS, 2002,99:12825–12830
本方法只适用于提大鼠细胞线粒体蛋白,而不适用于线粒体功能检测
win10自带的应用哪些可以卸载
可以卸载win10自带的应用有下面这些:
Adobe Reader X MUI
Instant On
live update
ASUS power4gear hybrid:
asus screen saver
asus smart gesture
ASUS Splendid Video Enhancement Technology
ASUS USB Charger Plus
ASUS Webstorage Sync Agent
McAfee Internet Security
mybitcast 2.0
windows 软件包2012
卸载win10的自带应用的方法如下:
要卸载这些所有内置应用,就要用到Windows PowerShell,它是win10系统自带的一个应用,要打开它,就单击开始菜单中的“所有应用”,然后找到Windows Power Shell的文件夹,右键单击Windows PowerShell,然后单击以管理员身份运行,就打开了。
打开了Windows PowerShell输入命令
要卸载OneNote,在里面输入Get-AppxPackage *OneNote* | Remove-AppxPackage
要卸载3D,输入Get-AppxPackage *3d* | Remove-AppxPackage
要卸载Camera,输入Get-AppxPackage *camera* | Remove-AppxPackage
要卸载邮件和日历,输入Get-AppxPackage *communi* | Remove-AppxPackage
要卸载新闻订阅,输入Get-AppxPackage *bing* | Remove-AppxPackage
要卸载Groove音乐、电影与电视,输入Get-AppxPackage *zune* | Remove-AppxPackage
要卸载人脉,输入Get-AppxPackage *people* | Remove-AppxPackage
要卸载手机伴侣,输入Get-AppxPackage *phone* | Remove-AppxPackage
要卸载照片,输入Get-AppxPackage *photo* | Remove-AppxPackage
要卸载纸牌游戏,输入Get-AppxPackage *solit* | Remove-AppxPackage
要卸载录音机,输入Get-AppxPackage *soundrec* | Remove-AppxPackage
要卸载Xbox,输入Get-AppxPackage *xbox* | Remove-AppxPackage
Additional twinning wisps are not shown.Surface graining is not shown.
备注(COMMENTS)备注项描述的是一些无法列入上述数据内或无需标注于附图上的特征,例如:
1、结晶纹(GRAINING或GRAIN LINES):结晶纹除非出现有颜色、反光或发白,通常不视为内含物特征,亦不描画于附图上。结晶纹依其出现的明显程度分为(1)NIL没有;(2)SLIGHT轻微;(3)MODERATE易见;(4)SIGNIFICANT明显等四级,仅有出现明显的结晶纹才记述于此栏内。例如:SURFACE GRAINING IS NOT SHOWN(表面结晶纹未显示于附图上)。INTERNAL GRAIN LINES ARE NOT SHOWN(内部结晶纹未显示于附图上)。
2、没有描述于附图上的。例如:MINOR DETAILS OF POLISHES ARE NOT SHOWN(磨光方面的次要细节未显示于附图上)。ADDITIONAL PINPOINTS ARE NOT SHOWN(另外有一些针点状包体未显示于附图上)。
3、主要的比例、角度或对称不良。例如:CROWN ANGLES ARE GREATER THAN 35 DEGREES(冠角大于35度)
所以。其实这个就是备注一些钻石的其他信息的,或者是某些信息没有在图片上显示。没啥大碍的。哈
如果此栏是空白 没有标注 是不是就说这钻石在同等的H SI1 3EX情况下 没有标注会比有标注的那颗好呢??但没标注的只有个1.08的 我有个朋友是这样说 简单说证书越少东西越干净这石头就越好. 请专家帮我解答下此疑问 谢谢
差不多把。。。而且都是SI净度的钻石了。。有没写其实差别不大的。。因为放大镜一看里面已经都是瑕疵了。。- -,
来自:求助得到的回答请问为什么我在ubuntu下安装软件都是提示没有在root下面
最后两句的提示的意思是,你曾经有过对这个目录的操作,但是被意外中断了,所以,对这个目录的锁定没有被解除,现在再想操作时,就遇到锁定无法解除的问题。
解决办法很简单,执行如下命令:
sudo rm /var/cache/apt/archives/lock
sudo rm /var/lib/dpkg/lock
然后再执行你需要的安装命令即可
在Ubuntu下,除非特别指定,否则你不会是默认具有root权限。这个和微软操作系统完全不同。所以,当你做与系统有关的操作时,必须先声明自己的权限,比如采用sudo指令。
如何使用charles抓取手机上的操作
Charles上的设置
要截取iPhone上的网络请求,我们首先需要将Charles的代理功能打开。在Charles的菜单栏上选择“Proxy”->“Proxy Settings”,填入代理端口8888,并且勾上”Enable transparent HTTP proxying” 就完成了在Charles上的设置。如下图所示:
iPhone上的设置
首先我们需要获取Charles运行所在电脑的IP地址,打开Terminal,输入ifconfig en0, 即可获得该电脑的IP,如下图所示:
在iPhone的 “设置”->“无线局域网“中,可以看到当前连接的wifi名,通过点击右边的详情键,可以看到当前连接上的wifi的详细信息,包括IP地址,子网掩码等信息。在其最底部有“HTTP代理”一项,我们将其切换成手动,然后填上Charles运行所在的电脑的IP,以及端口号8888,如下图所示:
设置好之后,我们打开iPhone上的任意需要网络通讯的程序,就可以看到Charles弹出iPhone请求连接的确认菜单(如下图所示),点击“Allow”即可完成设置。
软件使用:
切换视图显示
enter image description here
上图中的7个位置是最常用的几个功能。
1 那个垃圾桶图标,功能是clear,清理掉所有请求显示信息。
2 那个望远镜图标,功能是搜索关键字,也可以使用ctrl+f实现,可以设置搜索的范围。
3 圆圈中间红点的图标,功能是领抓去的数据显示或者不显示的设置。 这个本人认为是charles工具很方便的一个两点,一般都使其为不显示抓去状态,只有当自己测试的时候的前后,在令其为抓取并显示状态。这样可以快准狠的获取到相关自己想要的信息,而不必在一堆数据请求中去寻找。
4 编辑修改功能,可以编辑修改任意请求信息,修改完毕后点击Execute就可以发送一个修改后的请求数据包。
5 抓取的数据包的请求地址的url信息显示。
6 抓取的数据包的请求内容的信息显示。
post请求可以显示form形式,直观明了。
7 返回数据内容信息的显示。
其中5、6、7中都有各种形式的数据显示形式,其中raw是原始数据包的状态。
解决中文乱码
Response中文乱码:在Info.plist 中 的vmoption 添加-Dfile.encoding=UTF-8
info.plist路径 程序->Charles.app->显示包内容->Info.plist
Warning: the high memory area (HMA) is not available.Additional low memory (
所用的系统盘不行,直接换个验证过的系统盘重装系统就行了,这样就可以全程自动、顺利解决系统安装的问题了。用u盘或者硬盘这些都是可以的,且安装速度非常快。但关键是:要有兼容性好的(兼容ide、achi、Raid模式的安装)并能自动永久激活的、能够自动安装机器硬件驱动序的系统盘,这就可以全程自动、顺利重装系统了。方法如下:
1、U盘安装:下载个经过验证的系统安装盘文件(ISO文件),用ultraiso软件做个安装系统的启动u盘,用这个做好的系统u盘引导启动机器后,即可顺利安装系统的;
2、硬盘安装:前提是,需要有一个可以正常运行的Windows系统,提取下载的ISO文件中的“*.GHO”和“安装系统.EXE”到电脑的非系统分区,然后运行“安装系统.EXE”,直接回车确认还原操作,再次确认执行自动安装操作。(执行前注意备份C盘重要资料!);
什么办法都用过了,进工具箱就这样
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